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液相色譜法的主要類型及其分離原理

  • 更新日期:2018-10-11      瀏覽次數(shù):12077
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        根據(jù)分離機制的不同著力提升,液相色譜法可分為下述幾種主要類型:1 多種。液 — 液分配色譜法Liquid-liquid Partition Chromatography及化學鍵合相色譜Chemically Bonded Phase Chromatography流動相和固定相都是液體機構。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶(極性不同帶來全新智能,避免固定液流失)持續發展,有一個明顯的分界面各方面。當試樣進入色譜柱兩個角度入手,溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時應用,服從于下式:

       

        式中建議,cs—溶質(zhì)在固定相中濃度;cm--溶質(zhì)在流動相中的濃度; Vs—固定相的體積;Vm—流動相的體積。LLPCGPC有相似之處相貫通,即分離的順序取決于K不斷發展,K大的組分保留值大;但也有不同之處,GPC中自動化方案,流動相對K影響不大緊密協作,LLPC流動相對K影響較大。

       

        a. 正相液 — 液分配色譜法Normal Phase liquid Chromatography: 流動相的極性小于固定液的極性線上線下。

       

        b. 反相液 — 液分配色譜法Reverse Phase liquid Chromatography: 流動相的極性大于固定液的極性發揮重要作用。

       

        c. 液 — 液分配色譜法的缺點:盡管流動相與固定相的極性要求*不同,但固定液在流動相中仍有微量溶解;流動相通過色譜柱時的機械沖擊力數據顯示,會造成固定液流失高質量。上世紀70年代末發(fā)展的化學鍵合固定相(見后),可克服上述缺點∮浀美?,F(xiàn)在應(yīng)用很廣泛(70~80%)註入了新的力量。

       

        液 — 固色譜法流動相為液體,固定相為吸附劑(如硅膠行業分類、氧化鋁等)技術特點。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來進行分離的。其作用機制是:當試樣進入色譜柱時發展邏輯,溶質(zhì)分子 X 和溶劑分子S對吸附劑表面活性中心發(fā)生競爭吸附(未進樣時凝聚力量,所有的吸附劑活性中心吸附的是S),可表示如下:Xm nSa ====== Xa nSm式中:Xm--流動相中的溶質(zhì)分子;Sa--固定相中的溶劑分子;Xa--固定相中的溶質(zhì)分子;Sm--流動相中的溶劑分子聽得進。

       

        當吸附競爭反應(yīng)達平衡時:K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]式中:K為吸附平衡常數(shù)新的力量。[討論:K越大,保留值越大便利性。]3 全面展示。離子交換色譜法Ion-exchange ChromatographyIEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進行可逆交換深刻認識,依據(jù)這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離核心技術。

       

        以陰離子交換劑為例,其交換過程可表示如下:X-溶劑中 樹脂-R4N Cl-=== 樹脂-R4N X- Cl- 溶劑中當交換達平衡時:KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]分配系數(shù)為:DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-][討論:DX與保留值的關(guān)系]凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來進行分離主動性。

       

        4 創造性。離子對色譜法Ion Pair Chromatography離子對色譜法是將一種 或多種 與溶質(zhì)分子電荷相反的離子 稱為對離子或反離子 加到流動相或固定相中,使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對化合物道路,從而控制溶質(zhì)離子的保留行為規模設備。其原理可用下式表示:X 水相 Y-水相 === X Y-有機相式中:X 水相--流動相中待分離的有機離子(也可是陽離子);Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對(如氫氧化四丁基銨真諦所在、氫氧化十六烷基*銨等);X Y---形成的離子對化合物。

       

        當達平衡時:KXY = [X Y-]有機相/[ X ]水相[Y-]水相根據(jù)定義競爭力,分配系數(shù)為:DX= [X Y-]有機相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相[討論:DX與保留值的關(guān)系]離子對色譜法特別是反相發(fā)解決了以往難以分離的混合物的分離問題充分,諸如酸、堿和離子集聚、非離子混合物競爭力,特別是一些生化試樣如核酸、核苷狀況、生物堿以及藥物等分離兩個角度入手。

       

        5 。離子色譜法Ion Chromatography用離子交換樹脂為固定相同期,電解質(zhì)溶液為流動相。以電導(dǎo)檢測器為通用檢測器使命責任,為消除流動相中強電解質(zhì)背景離子對電導(dǎo)檢測器的干擾效果,設(shè)置了抑制柱。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同情況較常見。

       

        以陰離子交換樹脂(R-OH)作固定相可持續,分離陰離子(Br-)為例。當待測陰離子Br-隨流動相(NaOH)進入色譜柱時體製,發(fā)生如下交換反應(yīng)(洗脫反應(yīng)為交換反應(yīng)的逆過程)

       

        抑制柱上發(fā)生的反應(yīng):R-H Na OH- === R-Na H2OR-H Na Br- === R-Na H Br-可見構建,通過抑制柱將洗脫液轉(zhuǎn)變成了電導(dǎo)值很小的水,消除了本底電導(dǎo)的影響;試樣陰離子Br-則被轉(zhuǎn)化成了相應(yīng)的酸H Br-服務延伸,可用電導(dǎo)法靈敏的檢測共創輝煌。

        6 ∵M一步?臻g排阻色譜法Steric Exclusion Chromatography空間排阻色譜法以凝膠 gel 為固定相大部分。它類似于分子篩的作用,但凝膠的孔徑比分子篩要大得多實際需求,一般為數(shù)納米到數(shù)百納米解決方案。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離,而是按分子大小進行分離善謀新篇。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動力學體積或分子大小有關(guān)增產。試樣進入色譜柱后,隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過方法。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻行動力,因此就直接通過柱子,首先在色譜圖上出現(xiàn)穩中求進,一些很小的分子可以進入所有膠孔并滲透到顆粒中統籌,這些組分在柱上的保留值大,在色譜圖上后出現(xiàn)。 

     
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